祝建波 , 何黎 , 邱红林 , 陈泉 , 闫甜甜 , 程晨

石河子大学农业生物技术重点实验室, 石河子, 832000
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2013 年, 第 11卷, 第 15 篇   doi: 10.3969/mpb.011.000578
收稿日期: 2013年01月18日    接受日期: 2013年03月15日    发表日期: 2013年06月05日

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利用NCBI、CODEHOPE、Primer Premier5.0等数据库和生物软件设计兼并引物，以矮牵牛花柱cDNA为模板，利用RT-PCR扩增到1条长为417 bp的序列，在GenBank中比对发现，该序列与SX基因相似性最高。然后以SX序列为模板设计特异性引物，RT-PCR扩增到1条全长为747 bp的目的片段，测序结果分析表明，该基因核苷酸序列开放阅读框全长660 bp，编码220个氨基酸，其中包括有22个氨基酸的跨质膜信号肽区，和5个保守区(C1-C5)以及2个高变区(Hva, Hvb)，据前人研究所知，该基因具有S-核酸酶功能。同时，从番茄DNA中克隆到一长为717 bp的花粉特异性启动子LAT52。为了使SX基因能在花粉中发挥其S-核酸酶功能，去掉22个氨基酸跨质膜信号肽(命名为sx)之后，与番茄花粉特异性启动子LAT52嵌合构建植物表达载体并转化拟南芥。TTC染色结果表明，LAT52能特异性的在花粉中调控sx基因的表达，使花粉活力很低甚至没有活力，从而使转基因植株不育。

矮牵牛；SX基因；克隆；功能分析